Что такое электрофорез в полиакриламидном геле?
Jul 29, 2024Полиакриламид гель-электрофорез (PAGE) — это метод, обычно используемый в биохимии, молекулярной биологии и биотехнологии для разделения и анализа биомолекул, особенно белков и нуклеиновых кислот, в зависимости от их размера и заряда. Этот метод предполагает использование гелевой матрицы, состоящей из полиакриламида — вещества, которое при полимеризации образует пористую сетку.
Во время приготовления геля мономеры акриламида смешивают со сшивающим агентом, обычно бис-акриламидом, и инициатором полимеризации. Затем эту смесь выливают в лоток для отливки геля и оставляют полимеризоваться с образованием твердого геля. Концентрация акриламида определяет диапазон размеров молекул, которые можно разделить: более низкие концентрации подходят для более крупных молекул, а более высокие концентрации — для более мелких молекул.
После затвердевания геля его помещают вертикально в аппарат для электрофореза, состоящий из двух электродов, подключенных к источнику питания. Гель погружен в буферный раствор, проводящий электричество. Образцы, содержащие интересующие биомолекулы, обычно смешанные с загрузочным буфером, загружаются в лунки, сделанные в геле.
При подаче электрического тока биомолекулы мигрируют через матрицу геля. Миграция происходит за счет электрического заряда, переносимого биомолекулами, и их взаимодействия с матрицей геля. Молекулы меньшего размера движутся через поры геля быстрее, тогда как молекулы большего размера задерживаются и мигрируют медленнее.
После процесса электрофореза гель можно окрасить специфическими красителями или обработать антителами для визуализации и обнаружения разделенных биомолекул. Полученное изображение геля или рисунок полос могут предоставить информацию о размере, форме и относительном количестве молекул в образце. Исследователи часто используют PAGE для идентификации белков, анализа белковых комплексов, оценки чистоты белков и определения размера фрагментов нуклеиновых кислот.
ТЕГИ :